反相Flash柱层析可以干法上样吗?

过柱机biotage 26-01-21 16:53:50

反相Flash柱层析可以干法上样吗?柱层析是有机合成中常用的分离纯化手段,大公司合成实验室一般都配备自动化程度比较高的分离纯化工具---快速制备色谱仪(中低压制备色谱),在医药外包公司俗称过柱机。由名字可知,这就是个替代手工过柱的工具,他所用到的柱子我们常叫它Flash柱。除了可以用来过硅胶正相柱,还可以过乙腈(甲醇)/水体系的C18填料的反相柱,反相柱一定程度上可以替代制备液相色谱,特别是大量样品分离时,可以节省大量成本。

图片
 

往期文章: 【柱层析技术】中已经详细介绍了湿法上样和干法上样,文章中主要是介绍了硅胶柱柱层析技术,因此用过柱机过正相硅胶柱时情况类似。对于乙腈(甲醇)/水体系的C18填料的反相柱,湿法上样是应用广泛,使用简单的上样技术。如果是固体样品,只需将样品直接溶解在尽量少的溶剂中,然后注入色谱柱中即可完成上样,而如果是液体样品,其上样方式则会更简单,直接将样品注入色谱柱即可。但是湿法上样有一些缺点:1、当上样体积增大时,样品在色谱柱当中所占用的体积会增大,扩散效应也会明显增强,导致色带变宽,降低分离效率,纯度也随之降低;2、请尽量使用大极性的溶剂溶解样品,如果极性过小,样品还没有来得及和固定相相互作用,就已经被极性溶剂洗脱下色谱柱,导致保留时间不够,洗脱不充分,分离效率大大降低。特别是极性特别大的样品,湿法上样后很容易直接把样品冲出,没有分离效果。C18反相柱能否像正相硅胶柱一样,拌样后,进行干法上样呢?小编亲试,完全可以进行干法上样,缺点就是C18填料有点贵,但是拌样后的C18填料可以冲洗干净后可以重复利用。与硅胶柱的拌样类似,先用沸点较低溶剂溶解样品,加入C18硅胶后,旋干,然后将干粉转移到空柱子中,填料上方加上筛板或脱脂棉都可以,旋紧,将上样柱接在反相柱上直接过柱就可以了(建议先将反相柱平衡好,接上上样柱后直接运行梯度)。

反相柱干法上样相比湿法有以下优点:一、干法上样峰型变窄,分离效果明显提高。二、另外对于一些溶解度较差的样品,如果利用湿法上样,需要用大量的溶剂溶解,因此上样量受到限制,如果一次上太多,分离效果很差,但干法上样克服了此缺点。三、还有一些样品湿法上样注入反相柱后,直接从水相比例较高的梯度开始冲柱时,产品会迅速析出,导致柱子堵住,干法上样则很少堵柱。四、对于大极性的化合物(LCMS保留时间在0.5min以内的化合物),湿法上样,有时直接用水相就可以将化合物冲出,用干法上样则可以明显提高柱效以及分离样品纯度。

仪器推荐
  1. VELP EMA 502 CHNS-O多元素分析仪:测定碳、氢、氮、硫和氧元素

    VELP EMA 502 CHNS-O多元素分析仪:测定碳、氢、氮、硫和氧元素

    VELP EMA 502 CHNS-O元素分析仪 准确的、多功能的、支持ERMES物联网云平台的紧凑型元素分析仪,用于测定碳、氢、氮、硫和氧元素,载气使用氦气或者氩气。 一体化的解决方案,拓宽您的分析潜力 EMA 502元素分析仪……

    VELP,代理品牌,进口仪器 2026-01-28

  2. 比利时 DIAGENODE bioruptor PLUS 非接触式超声波破碎仪

    比利时 DIAGENODE bioruptor PLUS 非接触式超声波破碎仪

      Diagenode的bioruptor®采用超声波技术,破坏,分散,或剪切各种样品 ,用应用于生物、化工、制药与工业等领域, bioruptor®广泛应用在生物领域,作为DNA与染色体的剪切,细胞裂解和蛋白质的提取。 bioruptor®优……

    Diagenode,代理品牌,进口仪器 2026-02-04

  3. 中药分离纯化哪款过柱机效果好?

    中药分离纯化哪款过柱机效果好?

    中药分离纯化哪款过柱机效果好?由于中药、天然药物成分比较复杂,多样的作用,工艺及技术繁多。在这方面的新方法和新技术不断的出现,不一样的方法和技术运用应考虑针对不同重点的研究。一般情况下参数的不同会影……

    过柱机 2026-02-06

  4. 达远辰光LLOT1 荧光计

    达远辰光LLOT1 荧光计

    LLOT1 荧光计 产品介绍 达远辰光LLOT1荧光计是款非常小巧的微量核酸定量及蛋白质浓度检测设备,仪器采用荧光检测原理,仅需1~20 μL样品即可获得准确的检测结果。检测灵敏度高,检测范围广,检测时间短,是科研实验室检……

    达远辰光 2026-01-29

  5. 奥豪斯水分分析仪OHAUS MB90

    奥豪斯水分分析仪OHAUS MB90

    OHAUS MB90 水分分析仪 快速精准的水分测定仪 水分测定从未如此简便。MB90的卤素加热系统可均匀加热并快速获得精确的测试结果。腔体部件无需特殊工具即可快速装卸,易于清洁保养。 MB90 水分分析仪 特征   &……

    OHAUS 2026-01-26

  6. LAUDA Proline校验恒温器/进口校准恒温器

    LAUDA Proline校验恒温器/进口校准恒温器

      LAUDA Proline校验恒温器:提供温度范围从-40到300C的校准和调整 校准和调整所需的高性能全面的解决方案 LAUDA校验专用恒温器为校准和调节提供了一个稳定的恒温和均一性良好的测试腔环境。根据测试所需要的……

    LAUDA 2026-01-26

今日仪器
  1. 上海书俊公司简介

    上海书俊公司简介

    上海书俊仪器设备有限公司成立于2013年,致力于将全球的仪器和技术引入中国,为高校,科研院所,企业等系统客户提供完整的解决方案及优质的售后服务。现在全国设有北京、广州、武汉、南京、杭州、厦门、西安、成都……

    公司介绍 2026-02-07

  2. Boekel Scientific RapidFISH 载玻片杂交仪,240200

    Boekel Scientific RapidFISH 载玻片杂交仪,240200

    Boekel Scientific RapidFISH 旨在简化 FFPE(福尔马林固定石蜡包埋组织)样品、细胞悬液和其他组织制备程序的荧光原位杂交 (FISH) 程序。温度控制和湿度对于 FISH 探针与 RNA 和 DNA 结合至关重要。RapidFISH 具有……

    Boekel,进口杂交箱 2026-02-07

  3. 美国PRO PRO200手持、台式两用均质器

    美国PRO PRO200手持、台式两用均质器

    PRO200产品特点: 1. 美国PRO* PRO200手持、台式两用均质器速度快、扭矩高、噪音低 2. 约12种快速连接转子可供用户选配 ,适应大范围样品量 3. 高质量不锈钢的转子材料,可进行各种消毒灭菌(火焰、 热空气、高温高……

    PRO,代理品牌,进口仪器 2026-02-07

返回顶部小火箭